본 기술은 특정 단백 질에 특이적으로 반응할 수 있는 단일클론 항체가 결합된 비드와 형광이 표지된 마이크로스피어를 결합시킨 마이크로스피어-비드를 이용하여 미량으로 존재하는 단백질 정량 방법에 관한 것임

δ-카테닌 과발현 세포주인 M6A 세포 용해액 내 δ-카테닌 단백질을 검출하기 위해 질량별(1, 2.5, 5, 10, 20㎍) Western blot을 수행한 결과, 1㎍ 수준에서는 주어진 조건의 Western blot으로 검출이 어렵다는 것을 확인함

δ-카테닌 단백질에 대한 단일클론 항체가 결합되어 있는 비드를 제작하고, 상기 비드를 인식할 수 있는 피코에리트린(phycoerythrin, PE)이 표지된 검출항체를 이용하여 검출함

마이크로스피어-비드 방식으로 M6A 세포 용해액 내 δ-카테닌 단백질을 분석한 결과, 마이크로스피어 비드를 제작할 때 사용하는 d-카테닌 항체의 양이 5, 8, 12 ug 중 5 ug 일 때 가장 직선성이 좋은 정량결과를 보였음

검출 항체의 희석 비율은 1:1, 1:10 모두에서 비슷한 직선성 및 비슷한 양상의 직선의 방정식이 구해졌지만 검출의 민감도를 고려한다면 1:1의 희석비율이 가장 적합한 것을 확인함

마이크로스피어_비드를_이용한단백질_정량방법.pdf